困難かつ疎水性ペプチドの合成

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ペプチド配列が疎水性すぎませんか?簡単に集計できますか？複数対のジスルフィド結合? Science-Peptide の難しいペプチド合成および疎水性ペプチド合成サービスは、あらゆる種類の「できない」問題に特化しています。. 20 長年の経験、特殊な溶媒システム、安定した納品を実現しています。お気軽にお問い合わせください。

どのようなペプチドが「難しい」と考えられますか?
私はペプチド合成の仕事に20年携わっており、あらゆる難しいペプチドを見てきました。顧客が私たちに来るとき、すでに何社かに問い合わせていますが、返ってくる答えは「できません」か「試してみても保証はありません」のどちらかです。

疎水性の強いペプチド：膜貫通領域、シグナルペプチド、疎水性アミノ酸、合成すると樹脂上で固まってしまい、後ろのアミノ酸が入り込めなくなります。
アミロイドペプチドや抗菌ペプチドなど凝集しやすいペプチドは合成時に山積みになり、精製時にカラムに詰まります。
複数対のジスルフィド結合を持つペプチド: 3 対を超えると、対の順序を 1 つ間違えると、分子全体が台無しになります。
長いペプチド: アミノ酸が 60 個を超え、段階ごとに収量が減少し、最終的には何も残りません。
修飾の複雑な組み合わせ: リン酸化、蛍光、環化、および相互に競合する条件。
それらすべてを受け入れることができますが、それは「試す」ことではなく、「計画を立てる」ことです。

1. 疎水性ペプチド: 特殊な溶媒システムを使用
疎水性ペプチドの難しさは、従来の溶媒に溶解できず、合成されるとペプチド鎖が樹脂上で「凝集」し、その背後にあるアミノ酸が侵入できなくなるという事実にあります。

私たちのソリューション:
特殊な溶媒の組み合わせ: DMF、NMP、DCM 混合システムに少量の液体離型剤を加え、ペプチド鎖を伸長した状態に保ちます。
温度の最適化: 一部の反応は室温より 40 度の方が良好ですが、一部の反応は 0 度まで下げる必要があり、それらを 1 つずつ試しました。
樹脂の選択: 疎水性ペプチドには高溶解性樹脂を使用して、ペプチド鎖のための十分なスペースを残します。
可溶化ラベル: それができない場合は、親水性ラベルを追加し、合成後に切断します。

実際のケース: 35aa 膜貫通ペプチド、疎水性アミノ酸が 70% を占める場合、顧客は 3 社探してもできませんでした。溶媒系を変更し、可溶化ラベルを追加したところ、最終的に純度は92%となり、お客様は構造検討をスムーズに行うことができました。

2. 複数対のジスルフィド結合: 運が悪い、戦略
ジスルフィド結合が多いほど、それらをペアにするのは難しくなります。 2足ならまだしも、3足以上になると一歩間違えば終わりです。
私たちの戦略:
直交保護: Trt、Acm、tBu などの異なる保護基を使用して、Cys を開いて段階的にペアにすることができます。
酸化条件の最適化: 空気酸化、グルタチオン酸化、ヨウ素酸化、ペプチドごとに異なる方法。
中間 QC: 各ペアの後、MS のサンプルを採取し、次に進む前にペアリングを確認します。
MS/MS 確認（オプション）: 二次質量分析で最終的に分解し、ジスルフィド結合が実際にどこに結合しているかを確認します。{0}

A real case: A conotoxin peptide containing four pairs of disulfide bonds was rejected by many companies. We designed a four-step oxidation strategy, which took six weeks, and delivered >純度 90%、正しく対になったジスルフィド結合、および結晶構造はその後顧客によって解決されました。

3. 凝集しやすいペプチド: 防御しながら合成する-
アミロイドタンパク質や抗菌ペプチドなど、一部のペプチドはもともと凝集を好みます。これらは合成時に凝集を開始し、精製時にカラムを詰まらせ、手元にあるときには溶解できません。
私たちのソリューション:
擬似プロリン: 擬似プロリンは、凝集傾向を破壊し、合成後に元に戻すために Ser/Thr 位置に導入されます。
セグメント合成: 重合しすぎたペプチドはいくつかのセグメントに切断され、個別に合成され、最後に再接続されます。
精製条件の最適化: 高温、酸性 pH、有機溶媒の添加により非重合性となる条件を見つけます。-

4. 複雑な修飾子の組み合わせ: 争いのない条件
一部のペプチドには、リン酸化、蛍光標識、環化などの複数の要件があります。これらの修飾は互いに競合する可能性があります-。たとえば、リン酸化は酸を嫌います-、蛍光標識は光を嫌います-、環化には特定のpHが必要です。
私たちのアプローチ:
保全戦略の設計: どのトリミングを最初に行うか、どのトリミングを後で行うかを事前に設計します。
直交条件: 反応の各ステップの条件は、すでに行われた変更には影響しません。
中級 QC: 修正の各ステップの後、次に進む前にサンプルを採取して、修正が正しく行われたことを確認します。

5. 純度: 何をするかによる

各ペプチドには HPLC および MS レポートが添付されており、純度データが透明になります。

1. 私たちはこれを20年間続けています
難しいペプチド合成は誰にでもできるものではありません。長年にわたり、私たちは膜貫通タンパク質、ウイルス融合ペプチド、コノトキシン、アミロイドタンパク質、抗菌ペプチドなど、多くの難しいペプチドを扱ってきました。私たちは、どの配列が問題を起こしやすいのか、どのような条件でそれらを防ぐことができるのかをよく理解しています。少なくとも、困難で疎水性のペプチド合成を求めて当社を訪れた場合、そのすべてを試す必要はありません。

2. 「試す」ではなく、「プログラムを持つ」です。
多くの企業が難しいペプチドに挑戦し、「試してみますが、保証はしません」と言います。僕らはそんなふうにはプレーしない。ご注文を受ける前に、配列、疎水性アミノ酸の割合、既知の凝集傾向の有無、ジスルフィド結合の対数、修飾が複雑かどうかなどを評価させていただきます。評価後、成功率とサイクルタイムをお知らせします。

出来ない注文は受けませんし、受けた注文は引き継がなければなりません。

3. 疎水性に特化した溶媒システム
疎水性ペプチドは当社の強みです。従来の溶剤で溶けない場合は溶剤を変更します。従来の温度で反応しない場合は、温度を調整します。従来の樹脂で対応できない場合は、樹脂を変更いたします。裏技として可溶化標識もあります。

4. 複数のジスルフィド結合ペア、段階的に--
ジスルフィド結合のペアが 3 つ以上ある場合は、段階的なアプローチをとります。--最初のステップは A を保護し、最初のペアを開くことです。 Bを保護し、2番目のペアをオープンします。 Cを保護し、3番目のペアをオープンします。各ステップの後、MS のサンプルを採取し、次に進む前にペアリングを確認します。最後に、MS/MS は壊れて検証され、推測することなくデータが提供されます。

5. 品質管理: 各ステップのデータ
難しいペプチドの品質管理にはさらに注意が必要です。
中間 QC: 各フラグメントおよび修飾の各ステップの後、最初に純度および分子量を測定します。
最終生成物: 純度については HPLC、分子量については MS。
溶解性テスト: 溶解しないペプチドが得られないように、推奨される溶媒と可溶化方法を提供します。
困難な疎水性ペプチド合成を行う場合、データがすべてを物語っており、すべてのステップを追跡できます。

• 納品形態: 凍結乾燥粉末、遠心分離管またはバイアル。
• 付属文書:COA (HPLC プロファイル + MS スペクトル)、合成レポート (オプション)。
• オプションの検査: ペプチド含有量、エンドトキシン、水分、アミノ酸組成、溶解度検査。
• カスタマイズされたパッケージング: お客様の要件に応じて分割およびマーキングします。
• すべての困難な疎水性ペプチド合成製品は、出荷前にシーケンスが正しいことと純度が標準に達していることを確認するためにレビューされます。

他の人に拒否されたことがある場合でも、自分の研究室ではできない場合でも、私たちに相談してください。難しい疎水性ペプチド合成を行うためのサイエンス-ペプチドを探している場合、少なくとも 1 つずつ試す必要はありません。

教えてほしいのですが：
ペプチド配列（またはターゲット情報）
これまでに他の人にやってもらったことはありますか？結果はどうなりましたか?
どのくらい（ミリグラム）
純度要件

いつ欲しいですか？

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